Quantificação do DNA e genotipagem de biópsias de embriões bovinos Gir e Girolando produzidos in vitro / DNA quantification and genotyping of biopsies obtained from Gyr and Girolando in vitro produced bovine embryos

A biópsia embrionária associada à genotipagem permite a obtenção de informações genômicas antes mesmo da transferência dos embriões. Neste estudo, foram avaliadas amostras biopsiadas de blastocistos bovinos transferidos para receptoras (n=47), sob a hipótese de que a raça (Gir ou Girolando), o estádio embrionário (blastocisto ou blastocisto expandido) e a competência para estabelecimento de prenhez (positiva ou negativa) afetariam a quantidade e a qualidade do DNA da amostra obtida. O DNA foi extraído, amplificado, quantificado por eletroferograma e genotipado. O parâmetro call rate (CR) foi adotado para mensurar a qualidade da genotipagem. Obteve-se concentração de DNA de 86,07±171,66ng/µL e CR 0,73±0,17. O CR não variou em função da quantidade de DNA nas amostras. As variáveis raça e estádio embrionário não influenciaram a concentração de DNA, nem o CR. Houve efeito da prenhez sobre o CR (P=0,0187), mas, como houve maior CR nas amostras provenientes do grupo prenhez negativa, não foi possível associar esse parâmetro à qualidade embrionária. Concluiu-se que a raça e a qualidade embrionária não afetam os parâmetros aqui estudados em amostras embrionárias, ou seja, embriões com maiores chances de implantação não refletem alta qualidade nas amostras de biópsia genotipadas.(AU)

Embryo biopsy associated with genotyping allows genomic information before embryo transfer. In this study, blastocyst biopsy samples from embryos transferred to recipients (n= 47) were evaluated, under the hypothesis that breed (Gyr or Girolando), embryonic stage (blastocyst or expanded blastocyst) and competence to establish pregnancy (positive or negative) would affect the quantity and DNA quality of samples. DNA was extracted, amplified, quantified by electropherogram and genotyped. The parameter call rate (CR) was used to measure the quality of genotyping. DNA concentration of 86.07±171.66ng/µl, and CR 0.73±0.17 was obtained. CR did not vary according to the amount of DNA in the samples. The variables breed and embryonic stage had no influence on DNA concentration or CR. There was pregnancy effect on the CR (P= 0.0187), but since there was a higher CR in the samples from the negative pregnancy group, it was not possible to associate this parameter with the embryonic quality. We conclude that the breed and embryo quality do not affect the evaluated parameters in embryonic samples. Embryos with higher chances of implantation do not reflect high quality in embryo biopsy genotyped samples.(AU)

Avaliação da satisfação dos usuários de serviços de Fisioterapia / Evaluation of physical therapy service user satisfaction

OBJETIVO: Caracterizar o perfil sociodemográfico e avaliar a satisfação dos usuários de serviços de Fisioterapia em Teresina (PI), com relação à agilidade para agendamento da consulta e atendimento, acolhimento, confiança, ambiência, humanização, acessibilidade, eficácia e expectativa sobre os serviços recebidos. MATERIAIS E MÉTODOS: A amostra foi constituída por 376 pacientes selecionados em três clínicas de fisioterapia da rede particular, municipal e estadual. Utilizou-se um questionário contendo dados sociodemográficos, de acesso ao serviço e informações relativas à satisfação dos usuários. Foram calculadas médias para variáveis contínuas por meio do teste de Kruskal-Wallis e do teste de Student-Newman-Keuls. RESULTADOS: Os usuários, na sua maioria, eram mulheres (62,5 por cento), com uma média de idade de 49,5 anos (p<0,01), casados, analfabetos, com renda familiar entre um e três salários mínimos e SUS-dependentes. Consideraram fácil o acesso aos serviços; o meio de transporte mais utilizado foi o coletivo, e gastaram uma média de tempo de 28,8 minutos (p<0,01) para chegar ao local de atendimento. Relataram não ter tido nenhuma dificuldade no atendimento, porém 14 por cento referiram a marcação de consulta e o tempo de espera como os problemas enfrentados nos serviços das redes municipal e estadual. A indicação médica foi o motivo principal da escolha do serviço, confiavam no atendimento recebido e os resultados do tratamento foram alcançados. CONCLUSÕES: A despeito da insatisfação apontada, a maior parte tem satisfação (75,5 por cento) com o tratamento recebido e indicariam os serviços a terceiros.

OBJECTIVE: To evaluate user satisfaction about Physical Therapy services in the city of Teresina, State of Piauí, Brazil, and to characterize users' sociodemographic profile and evaluate their satisfaction regarding the time required to setting up appointments and to provide services, reception, trust, ambiance, humanization, accessibility, effectiveness and expectations relating to the services received. METHODS: The sample was comprised of 376 patients who were selected at three physical therapy clinics in the private, municipal and state networks. A questionnaire on sociodemographic characteristics, access to services and user satisfaction was administered. Averages for continuous variables were compared by means of Kruskal-Wallis and Student-Mewman-Keuls tests. RESULTS: Most of the users were women (62.5 percent), with a mean age of 49.5 years. They were married and illiterate, had family income between one and three minimum wages and were dependent on the national health system. They considered that they had easy access to the services. The means of transportation most used was buses, and it took them on average 28.8 minutes to arrive at the service location. The services users indicated that they did not have any difficulty with the service, but 14 percent mentioned that setting up appointments and waiting times were problems they faced in the municipal and state services. Medical indication was the main reason for choosing the service. They trusted the service they received, and the expected treatment results were achieved. CONCLUSIONS: Despite the dissatisfaction shown, the majority (75.5 percent) were satisfied with the treatment they received and they said they would recommend the services to other users.

Associação entre o perfil andrológico e a congelação de sêmen de touros da raça Nelore aos dois anos de idade, pré-selecionados pela classificação andrológica por pontos (CAP) / Relationship between andrologic profile and semen freezing in two-year-old Nelore bulls, pre select by breeding soundness evaluation (BSE)

Avaliaram-se as características andrológicas (n=163) e de congelação do sêmen (n=55) de touros jovens da raça Nelore e estudou-se a associação entre essas avaliações, visando à localização de marcadores para alta fertilidade e congelabilidade do sêmen. Registraram-se diferenças (P<0,05) no perfil andrológico dos animais entre os anos, com reflexo no sucesso de congelação do sêmen (P<0,05). Registraram-se 26,6 por cento e 26,1 por cento de descarte de ejaculados, respectivamente, pré e pós-congelação, em função dos aspectos físicos do sêmen. As médias gerais de motilidade espermática, vigor e viabilidade pré e pós-congelação foram de 66,4±5,7 por cento, 4,8±0,4 e 76,3±8,5 por cento e de 29,4±8,5 por cento, 4,6±0,6 e 34,5±11,1 por cento, respectivamente. A taxa de recuperação pós-congelação foi de 44,5±13,4 por cento. Registraram-se correlações (P<0,05) entre peso corporal e motilidade (0,43) e padrão de recuperação espermática pós-congelação (-0,50). Correlações significativas (P<0,05) entre o volume ejaculado e a motilidade espermática (0,28), defeitos espermáticos totais (-0,32) e padrão de recuperação espermática (-0,37) foram estimadas. A correlação entre a concentração espermática e o padrão de recuperação espermática pós-congelação foi de 0,42. Correlações significativas (P<0,05) entre o formato dos testículos e a circunferência escrotal (0,58), os defeitos espermáticos totais (0,33) e a área das glândulas vesiculares (0,43) foram observadas também.

Andrologic (n=163) and semen freezing (n=55) parameters from young Nelore bulls were evaluated for two consecutive years, as well as their associations searching for andrologic markers for high fertility and semen freezing. Differences in andrologic profiles (P<0.05) between years were registered, reflecting the success of semen freezing, even after andrologic selection. Percentages of 26.6 and 19.5 of discharged ejaculates, pre and post-freezing, respectively, were recorded, due to physical semen parameters. Overall sperm motility, vigor, and viability means were, respectively, 66.4±5.7 percent, 4.8±0.4, and 76.3±8.5 percent pre-freezing; and 29.4±8.5 percent, 4.6±0.6, and 34.5±11.1 percent post-freezing. The post-freezing recovery mean was 44.5±13.4 percent. Significant correlations (P<0.05) between body weight and pre-freezing sperm motility (0.43) and post-freezing sperm recovery standard (-0.50) were estimated. Correlations were also observed (P<0.05) between volume of ejaculate and age (0.50), sperm motility (0.28), total sperm defects (-0.32), and post-freezing sperm recovery standard (-0.37). The correlation between sperm concentration and post-freezing sperm recovery standard was 0.42. Significant correlations (P<0.05) between testes shape and scrotal circumference (0.58), and total sperm defects (0.33) and vesicular gland area (0.43) were also observed.

Avaliação ultra-sonográfica da dinâmica folicular e lútea em vacas da raça Guzerá / Ultrasonographic evaluation of follicular dynamics and luteal function in Guzerá cows

Caracterizaram-se o padrão de crescimento folicular e a função lútea ao longo do ciclo estral em vacas da raça Guzerá (n=5), multíparas, não-lactantes. Os animais utilizados apresentavam idade e condição corporal semelhantes e peso corporal médio de 518± 48.5kg. A dinâmica folicular foi monitorada diariamente a partir do dia da ovulação, durante dois ciclos consecutivos, utilizando-se um aparelho de ultra-sonografia equipado com uma probe linear retal de 5MHz. Amostras de sangue foram coletadas a cada 48h, a partir do momento da ovulação, durante os dois ciclos. O primeiro ciclo foi sincronizado pela administração de um luteolítico (cloprostenol), e o segundo foi natural. Os folículos foram identificados e mensurados; e os dados obtidos, registrados em função do dia do ciclo. O comprimento do ciclo estral foi de 19,10± 1,86 dias. Observou-se maior incidência de ciclos com três ondas de crescimento folicular (50 por cento), mas ciclos com duas (37,5 por cento) ou quatro ondas (12,5 por cento) também foram identificados. O diâmetro máximo dos folículos dominantes não ovulatórios foi de 11,60± 2,37 mm, e dos folículos ovulatórios de 14,4± 0,5 mm. A taxa de crescimento dos folículos dominantes da primeira, segunda, terceira e quarta onda foi de 1,48± 0,60; 0,81± 0,13; 1,10± 0,27 e 1,33mm/dia, respectivamente. A concentração máxima de progesterona no diestro foi de 5,50± 0,92ng/ml. A raça Guzerá apresenta características da dinâmica folicular semelhantes àquelas observadas em outras raças zebuínas, como a tendência ao maior número de ondas de crescimento associadas à menor taxa de crescimento, diâmetro máximo e persistência dos folículos dominantes das ondas intermediárias

The follicular growth pattern and luteal function during the estrous cycle were studied using multiparous, non-lactating Guzerá cows (n=5). The animals presented similar age, body score condition, and mean body weight of 518 ± 48.5kg. Follicular dynamics was daily monitored between ovulations during two consecutive estrous cycles, using an ultrasound device equipped with a linear rectal 5MHz transducer. Blood samples were collected each 48h after ovulation, during the evaluated cycles. The first cycle was synchronized using a luteolytic agent (cloprostenol), and the second estrous cycle was natural. Follicles were identified and measured, and data were individually recorded according to the day of the cycle. The mean length of the cycles was 19.10 ± 1.86 days. There was a higher incidence of cycles presenting three follicular growth waves (50 percent), but cycles presenting two (37.5 percent) or three (12.5 percent) waves were also observed. The maximum diameter of non-ovulatory follicles was 11.60± 2.37mm, and that of ovulatory follicles was 14.40± 0.50mm. The growth rate of dominant follicles during the first, second, third and fourth waves were 1.48 ± 0.60; 0.81 ± 0.13; 1.10 ± 0.27 and 1.33mm/day, respectively. Progesterone maximum concentration during diestrus was 5.50± 0.92ng/ml. These results show that the Guzera breed presents characteristics of the follicular dynamics similar to those observed in other Zebu breeds, like the trend to a higher number of follicular waves associated with lower growth rate, maximum diameter and persistence of the dominant follicles emerging during non-ovulatory waves

A multiplex single-base extension protocol for genotyping Cdx2, FokI, BsmI, ApaI, and TaqI polymorphisms of the vitamin D receptor gene

The well-described role of the vitamin D endocrine system in bone metabolism makes its receptor a widely investigated candidate gene in association studies looking for the genetic basis of complex bone-related phenotypes. Most association studies genotype five polymorphic sites along the gene using PCR-RFLP and allele-specific amplification methods, which may not be the better choice in large case/control or cross-sectional studies. In this case, genotyping SNPs in parallel and using automated allele-calling methods are important to decrease genotyping errors due to manual data handling and save sample in cases where the amount of DNA is limited. The aim of this study was to present a straightforward method based on multiplex PCR amplification followed by multiplex single-base extension as a simple way to genotype five vitamin D receptor gene polymorphisms in parallel, which may be implemented in medium- to large-scale case/control or cross-sectional studies. The results regarding method feasibility and optimization are presented by genotyping eight paternity trios and seven samples of Brazilian postmenopausal women who took part in an ongoing association study carried out by members of our group.

Concentração espermática e tempo de incubação na fecundação in vitro usando-se sêmen de touros da raça Guzerá / Sperm concentration and incubation period on in vitro fecundation using sperm of Guzera bulls

Estudou-se o efeito da concentração espermática e período de incubação e da interação dessas características sobre a fecundação in vitro (FIV) usando-se sêmen de touros Guzerá. Oócitos (n=1146) maturados in vitro foram divididos em tratamentos objetivando a FIV, em esquema fatorial 3×2×2 (três touros - A, B e C, duas concentrações espermáticas - 2 e 4×10(6) espermatozóides/ml e dois tempos de incubação 12 e 18 horas). Utilizaram-se espermatozóides viáveis obtidos por swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5 por cento de CO2 e 95 por cento de umidade, a 38,5°C. Após incubação, 50 por cento dos oócitos foram fixados e corados para determinação das taxas de penetração, fecundação monoespermática e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da granulosa em meio CR2aa por oito dias, avaliando-se a taxa de clivagem e a produção de blastocisto. Houve maior taxa de penetração (P<0,05) na concentração de 4×10(6) espermatozóides/ml por 18 horas (64 por cento), e não se observou diferença (P>0,05) entre os demais tratamentos. A taxa de poliespermia foi maior (P<0,05) na concentração espermática de 4×10(6), independente do tempo de incubação. Na concentração espermática mais alta, a taxa de poliespermia foi maior no tempo de incubação de 18 horas (P<0,05). O touro A apresentou menor (P<0,05) taxa de poliespermia em relação aos demais. Ainda, no touro A a taxa de clivagem foi maior (P<0,05) que no touro B, enquanto o C mostrou-se semelhante tanto ao A quanto ao B. O tempo de incubação, a concentração espermática e a interação das variáveis influenciaram as taxas de penetração e poliespermia, sem interferir na taxa de fecundação monoespermática e na produção de blastocistos.

The effects of sperm concentration, incubation period and their interaction on in vitro fertilization (IVF) using sperm of Guzera bulls were evaluated. In vitro matured oocytes (n=1146) were allotted to IVF treatments in a factorial scheme 3×2×2 - three bulls (A, B and C), two sperm concentrations (2 and 4×10(6) spermatozoa/ml) and two incubation periods (12 and 18h). Viable spermatozoa were obtained by swim-up. The IVF was performed using in Fert-Talp medium with heparin, on incubator with 5 percent CO2 and 95 percent humidity, at 38.5°C. After the incubation, 50 percent of oocytes were fixed and stained to determine penetration, monospermic fecundation and polyspermy rates. The remainder was co-cultured with granulosa cells in CR2 medium for eight days to evaluate cleavage and embryo production rates. The penetration rate was higher (P<0.05) for sperm concentration of 4×10(6) spermatozoa/ml incubated for 18 hours (64 percent), and no differences (P>0.05) among remainder treatments were observed. The polyspermic rate (P<0.05) was higher for higher sperm concentration and incubation period. Bull A showed the lowest (P<0.05) polyspermy rate. Bulls A and C showed higher (P<0.05) cleavage than bull B. Incubation period, sperm concentration, and interaction of these two factors influenced penetration and polyspermy rates, without any effect on monospermic fecundation rates and embryos production.

Educação em saúde para a prevenção de Febre Reumática

Introdução: A Febre Reumática, doença resultante de uma faringoamigdalite estreptocócica não tratada adequadamente, pode cursar com seqüelas cardíacas graves e incapacitantes. Apesar de sua fácil prevenção, sua prevalência ainda é alta nos países subdesenvolvidos e em desenvolvimentos, em especial no Brasil, segundo dados do Data SUS. A falta de informação da população e dos próprios profissionais de saúde, é uma das causas que contribui para tais índices. No Rio de Janeiro, o Hospital Geral de Bonsucesso é um centro de referência para o acompanhamento de crianças e adolescentes portadores de febre reumática, sendo este, portanto cenário de atuação do presente trabalho. Materiais e métodos: Análise de 480 questionários elaborados e aplicados por estudantes de medicina do nono período e residentes; supervisionados por médicos do setor de cardiologia pediátrica e professores da UNESA. Objetivo: O objetivo geral do estudo é avaliar o grau de conhecimento de usuários, funcionários, estudantes e profissionais de saúde do HGB, a respeito da enfermidade - febre reumática. Com base nos dados obtidos são delineadas estratégias de atuação educacional visando à conscientização da prevenção da doença. Conclusão: Após análise dos dados colhidos de 480 questionários respondidos, constata-se a necessidade de uma maior divulgação interna do centro de referência de febre reumática do HGB e de seu campo de atuação, alem de se criar para a população leiga uma dinâmica de informação do diagnóstico precoce e tratamento correto das faringoamigdalites bacterianas, e reciclagem periódica para profissionais da área de saúde.

Crotacetin, a novel snake venom C-type lectin, is homolog of convulxin

Snake venom (sv) C-type lectins encompass a group of hemorrhagic toxins, which are able to interfere with hemostasis. They share significant similarity in their primary structures with C-type lectins of other animals, and also present a conserved carbohydrate recognition domain (CRD). A very well studied sv C-type lectin is the heterodimeric toxin, convulxin (CVX), from the venoms of South American rattlesnakes, Crotalus durissus terrificus and C. d. cascavella. It consists of two subunits, alfa (CVXa, 13.9 kDa) and beta (CVXb, 12.6 kDa), joined by inter and intra-chain disulfide bounds, and is arranged in a tetrameric a4b4 conformation. Convulxin is able to activate platelet and induce their aggregation by acting via p62/GPVI collagen receptor. Several cDNA precursors, homolog of CVX subunits, were cloned by PCR homology screening. As determined by computational analysis, one of them, named crotacetin b subunit, was predicted as a polypeptide with a tridimensional conformation very similar to other subunits of convulxin-like snake toxins. Crotacetin was purified from C. durissus venoms by gel permeation and reverse phase high performance liquid chromatography. The heterodimeric crotacetin is expressed in the venoms of several C. durissus subspecies, but it is prevalent in the venom of C. durissus cascavella. As inferred from homology modeling, crotacetin induces platelet aggregation but noticeably exhibits antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacteria

Avaliação da capacitação espermática in vitro pela reação acrossômica e viabilidade, em sêmen de touros Guzerá

O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacitação espermática pela reação acrossômica e viabilidade espermática de sêmende touros Guzerá. Utilizou-se sêmen de diferentes touros adquiridos de centrais de inseminação artificial. Após o descongelamento,o sêmen foi incubado inicialmente com 0 (T1) e 10 mg/ml (T2) de heparina por quatro horas a 39ºC e 95% deumidade, e posteriormente com lisofosfatidilcolina por mais 15 minutos, para indução da reação acrossômica. Antes e apóso período de incubação foram feitas lâminas para a análise da viabilidade espermática e reação acrossômica. Verificou-seque o tratamento com heparina aumentou a taxa de espermatozóides com reação acrossômica (p 0,05), e que houve diferençasna fertilidade entre os touros após a capacitação espermática. Conclui-se que o teste de reação acrossômica e viabilidadeespermática pode ser utilizado para avaliação da capacitação espermática in vitro de touros da raça Guzerá.

Eficiência digestiva em caprinos e ovinos. I - Composiçäo química da dieta, consumo e digestibilidade da matéria seca e da proteína, consumo de água e balanço do nitrogênio / Digestion efficiency in goats and sheep. I - Diet chemical composition, dry mater and protein intake and digestibility, watter intake and nitrogen balance

Determinaram-se o consumo e a digestibilidade dos nutrientes do feno de capim-guiné maduro (Panicum maximum cv. Guiné) em caprinos e ovinos, com o objetivo de comparar a eficiência da digestäo e o efeito da suplementaçäo nitrogenada e/ou energética. Foram utilizadas quatro fêmeas adultas de cada espécie, mantidas em gaiolas de metabolismo, adotando-se dois quadrados latinos 4 x 4, um para cada espécie estudada. Os tratamentos foram: A-feno, B-feno+30 por cento gräo de milho moído, C-feno+1,2 por cento uréia, D-feno+0,7 por cento uréia+30 por cento milho. Dentro de cada tratamento, näo foram verificadas diferenças significativas no consumo de matéria seca (MS) entre espécies. A suplementaçäo com milho ou uréia aumentou a ingestäo em ambas as espécies. Os caprinos apresentaram maiores valores de digestibilidade da MS e da proteína bruta (PB) para o feno näo suplementado. Os ovinos consumiram mais água/kg MS ingerida nesse tratamento. A suplementaçäo com uréia aumentou o consumo de MS nos ovinos. Nas duas espécies, a digestibilidade da PB foi aumentada. Nos dois tratamentos suplementados com milho, observou-se maior digestibilidade da MS. Com a melhoria do valor nutritivo da dieta, caprinos e ovinos mostraram, com algumas exceçöes, a mesma eficiência de utilizaçäo dos nutrientes, desaparecendo as diferenças entre as espécies. Os ovinos apresentaram maior retençäo de nitrogênio na dieta D

Eficiência digestiva em caprinos e ovinos. II - Consumo e digestibilidade de energia e digestibilidade dos componentes da fraçäo fibrosa / Digestion efficiency in goats and sheep. II - Energy intake and digestibility, and fibrous fraction digestibility

Determinaram-se o consumo e a digestibilidade dos nutrientes de feno de capim-guiné maduro (Panicum maximum cv. Guiné) em caprinos e ovinos, com o objetivo de comparar a eficiência da digestäo e o efeito da suplementaçäo nitrogenada e/ou energética. Foram utilizadas quatro fêmeas adultas de cada espécie, mantidas em gaiolas de metabolismo adotando-se dois quadrados latinos 4x4, um para cada espécie estudada. Os tratamentos foram: A-feno, B-feno + 30 por cento gräo de milho moído, C-feno + 1,2 por cento uréia, D-feno + 0,7 por cento uréia + 30 por cento milho. Nos caprinos, a digestibilidade da celulose e da lignina no tratamento A foi maior. A digestibilidade dos nutrientes näo foi afetada pela suplementaçäo. Tanto em ovinos como caprinos observou-se aumento da digestibilidade da energia e a digestibilidade da MS foi maior nos tratamentos que continham milho

Neurocriptococose por Cryptococcus neoformans näo capsulado / Neurocryptococcosis due to non capsulated Cryptococcus neoformans

Os autores registram um caso de neurocriptococose em paciente HIV-positivo, por Cryptococcus neofarmans acapsulado ou deficiente em cápsula. O quadro neurológico era de meningoencefalite subaguda, compatível ao diagnóstico de neurotuberculose, pelo exame do líquido cefalorraqueano (LCR). Estruturas leveduriformes foram encontradas no interior de macrófagos, ao exame citomorfológico do LCR. Cultivo do sedimento do LCR revelou a presença de Cryptococcus neoformans näo capsulado (identificaçäo bioquímica). A inoculaçäo da amostra em camundongo, por via intraperitoneal, permitiu a produçäo de cápsula que desaparecia em cultivos. Foi estudada a micromorfologia do fungo à microscopia eletrônica de varredura. A evoluçäo foi favorável com o emprego da anfotericina B associada a 5-fluoreocitosina. Näo foi caracterizada a variedade de Criptococcus neoformans agente do processo